免 疫熒光(IF)實驗操作步驟
日期：2025-04-03 17:14
瀏覽次數：159
摘要：
免 疫熒光(immunofluorescence，IF)，通常是指用熒光標記的抗體示蹤或檢查樣品中相應抗原的方法。
操作步驟：
1、細胞準備：對單層生長細胞，在傳代培養時，將細胞接種到預先放置有處理過的蓋玻片的培養皿中，待細胞接近長成單層后取出蓋玻片，PBS洗兩次；對懸浮生長細胞，取對數生長細胞，用PBS離心洗滌（1000rpm,5min）2次，用細胞離心甩片機制備細胞片或直接制備細胞涂片。
2、固定：根據需要選擇適當的固定劑固定細胞。固定完畢后的細胞可置于含疊氮納的PBS中4℃保存3個月。PBS洗滌3×5 min.
3、通透：...
免 疫熒光(immunofluorescence，IF)，通常是指用熒光標記的抗體示蹤或檢查樣品中相應抗原的方法。
操作步驟：
1、細胞準備：對單層生長細胞，在傳代培養時，將細胞接種到預先放置有處理過的蓋玻片的培養皿中，待細胞接近長成單層后取出蓋玻片，PBS洗兩次；對懸浮生長細胞，取對數生長細胞，用PBS離心洗滌（1000rpm,5min）2次，用細胞離心甩片機制備細胞片或直接制備細胞涂片。
2、固定：根據需要選擇適當的固定劑固定細胞。固定完畢后的細胞可置于含疊氮納的PBS中4℃保存3個月。PBS洗滌3×5 min.
3、通透：使用交聯劑（如多聚甲醛）固定后的細胞，一般需要在加入抗體孵育前，對細胞進行通透處理，以保證抗體能夠到達抗原部位。選擇通透劑應充分考慮抗原蛋白的性質。通透的時間一般在5-15min.通透后用PBS洗滌3×5 min.
4、封閉：使用封閉液對細胞進行封閉，時間一般為30min.
5、一抗結合：室溫孵育1h或者4℃過夜。PBST漂洗3次，每次沖洗5min.
6、二抗結合：間接免 疫熒光需要使用二抗。室溫避光孵育1h.PBST漂洗3次，每次沖洗5min后，再用蒸餾水漂洗一次。
7、封片及檢測：滴加封片劑一滴，封片，熒光顯微鏡檢查。